Panbio®登革全线产品
一、产品单页
Panbio®登革全线产品
二、登革热相关知识
从发病率和死亡率与经济成本来看，登革热为全球最严重的由蚊虫传播的病毒性疾病。该病毒主要是通过埃及伊蚊传播，超过100个国家报告过登革热爆发，有2.5亿人生活在登革高感染区，每年会发生5000万到1亿例登革出血热，200000-500000例登革感染者最终发展为登革出血热，平均有5%的登革出血热患者会死亡。
三、Panbio®登革全线产品
产品编码 名称 应用 人份 到货期 R-DEN03D 登革快速检测试剂 用于登革的快速检测 25 1～4周 E-DEN01P 登革早期ELISA 早期检测 96 1～4周 E-DEN01G 登革IgG间接ELISA 原发登革和血清转化血清流行病学观察 96 1～4周 E-DEN01M 登革IgM捕捉ELISA 原发登革检测 96 1～4周 E-DEN02G 登革IgG捕捉ELISA 继发登革检测 96 1～4周 E-DEN01D 登革IgM&IgG联检ELISA 原发登革于继发登革检测 192 1～4周
三、Panbio®产品具体介绍
1、登革快速检测试剂（Dengue Duo Cassette）,说明书见技术资料
用于定性的快速检测人群血清、血浆或全血中登革病毒的IgM及IgG抗体。可在15分钟内检测结果。
· 结果快速，15分钟出结果。  · 结果值得信赖，敏感性和特异性均>90%  · 方式灵活，样本可为全血、血清或血浆  · 能区分出登革的原发感染和继发感染  · 可进行完整的测试，保存方便，常温2-30℃保存
2、登革IgM捕捉ELISA（Dengue IgM Capture）,说明书见技术资料
用于定性的检测人群血清中登革病毒的IgM抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革热症状的病人的辅助诊断。
试剂中的抗原 登革病毒1-4型重组抗原 检测样本 血清 检测时间 2小时10分钟 有效期 18个月 规格 96孔   · 用于检测原发登革病毒感染   · 用于诊断活动期登革病毒   · 在登革病毒流行区和非流行区都适用   · 疾病发作3-5天即可使用 注意： 建议在继发登革热流行区采用登革热IgG ELISA捕捉试剂来检测作为登革病毒继发感染的标记物有时也不可靠
3、登革IgG捕捉ELISA（Dengo IgG Capture）,说明书见技术资料
用于定性检测血清中登革病毒（血清型1、2、3及4型）的IgG抗体。用于临床实验室对继发登革热感染的辅助诊断。 本产品与Panbio公司的IgM抗体捕捉产品结合使用，可以区别原发感染与继发感染。
试剂中的抗原 纯化登革病毒1-4型重组抗原 检测样本 血清 检测时间 2小时10分钟 有效期 18个月 规格 96孔  · 用于检测登革病毒继发感染  · 用于登革病毒感染活动期的诊断  · 用于登革病毒流行区的诊断  · 疾病发作后2-5天即可使用 注意：只能测出升高水平超过特定域值的IgG
4、登革早期ELISA（Dengue Early ELISA）,说明书见技术资料
用于定性检测血清中登革病毒的NS1抗原（血清型1、2、3及4型）。用于临床实验室对有持续发烧的登革热症状病人的辅助性诊断。
试剂中的抗原 登革病毒1-4血清型纯化抗原 检测样本 血清 检测时间 2小时10分钟 有效期 12个月 规格 96孔  · 用于急性登革热感染的早期诊断  · 在登革热病毒流行区和非流行区都适用  · 疾病发作1-7天即可使用 注意： 不能区分原发感染和继发感染；不能代替IgM和IgG抗体检测。
5、登革IgG间接ELISA（Dengue IgG Indirect）,说明书见技术资料
用于定性检测血清中登革病毒（血清型1、2、3及4型）的IgG抗体，用于临床实验室对具有持续发烧的登革感染症状或接触史的患者的辅助性诊断。
试剂中的抗原 登革病毒1-4血清型纯化抗原 检测样本 血清 检测时间 2小时40分钟 有效期 18个月 规格 96孔  · 用于检测先前的登革病毒感染  · 适用于流行病血清学研究  · 用于登革热非流行区使用 注意：对活动期登革病毒感染的检测能力有限
6、登革IgM & IgG联检ELISA（Dengue Duo IgM & IgG Capture）
用于定性检测血清中登革病毒的IgM和IgG抗体。可以区分原发感染与继发感染。
试剂中的抗原 登革病毒1-4血清型重组抗原 检测样本 血清 检测时间 2小时10分钟 有效期 18个月 规格 192孔  · 包装盒内同时有登革IgM捕捉ELISA试剂与IgG捕捉ELISA试剂  · 能够区分出登革的原发感染与继发感染
九：生产商相关信息
长久以来，澳大利亚Panbio公司在临床实验室应用的创新性的检测产品开发方面一直保持全球领先的良好记录。    Panbio一直在登革热（Dengue fever）、罗斯河热（Ross river fever）的诊断试剂产品方面保持着全球第一的市场地位。公司的西尼罗河脑炎（West Nile encephalopalitis）诊断试剂在全球首家获得美国FDA注册。    Panbio登革产品拥有全球最广的产品系列，有着全球最广的应用。

产品目录号	产品名称	中文名称	规格	价格	生产商
心血管
BI-20052	Endothelin (1-21)	内皮素（1-21）	96T	4900	Biomedica
BI-20072	Big Endothelin (1-38)	大内皮素（1-38）	96T	4900	Biomedica
BI-20032	OLAB	氧化低密度脂蛋白自身抗体	96T	5900	Biomedica
BI-20892	proANP(1-98)	房性排钠多肽（1-98）	96T	5800	Biomedica
BI-20802	proANP(1-30)	房性排钠多肽（1—30）	96T	5800	Biomedica
BI-20822	proANP(31-67)	房性排钠多肽（31—67）	96T	5800	Biomedica
BI-20852	Nt-proBNP	室性排钠多肽（N末端）	96T	5800	Biomedica
RE56011	Erythropoietin EPO	促红细胞生成素	96T	4600	IBL
CM 59011	CGRP	降钙素基因相关肽	96T	9000	IBL
CM 581021	cGMP	环GMP	96T	7000	IBL
CM500651	Cortisol	考的松	96T	2600	IBL
Ax51301	Homocystein	同型半胱氨酸	96T	8200	IBL
K9710s	CRP high-sensitive	高灵敏度C-反应蛋白	96T	2880	ID
K6630	Myeloperoxidase(MPO)	髓过氧化物酶	96T	4230	ID
K6840	PMN Elastase	弹性酶	96T	4050	ID
K9210	Relaxin	松弛素	96T	8910	ID
10-1106-01	Apo(a) ELISA a	载脂蛋白a	96T	2600	Mercodia
10-1143-01	Oxidized LDL ELISA	氧化低密度脂蛋白	96T	6500	Mercodia
其它
E-DEN01G	Dengue IgG Indirect	登革热IgG抗体（间接法）	96T	4800	Panbio
E-DEN02G	Dengue IgG Capture	登革热IgG抗体 （捕获法）	96T	5400	Panbio
E-DEN01M	Dengue IgM Capture	登革热IgM抗体（捕获法）	96T	5400	Panbio
E-DEN01D	Dengue IgM&IgG Capture	登革热IgM&IgG抗体（捕获法）	96T	10050	Panbio
E-HV601G	HHV-6 IgG	疱疹病毒—6 IgG抗体	96T	5700	Panbio
E-HV601M	HHV-6 IgM	疱疹病毒—6 IgM抗体	96T	6300	Panbio
ORG5MA	Micro-Albumin	微白蛋白	96T	1600	Orgentec
ORG643	Anti-Annexin V IgG/IgM	胎盘抗凝蛋白	96T	2800	Orgentec
ORG590	Dnase Activity	DNA酶活性	96T	6000	Orgentec
ORG642	Anti-ALPHA-Fodrin IgG/IgA	胞内器官特异性细胞骨架二聚体蛋白	96T	3000	Orgentec

登革热病毒是一种黄病毒属，广泛存在于热带和亚热带地区。世界上一半人口生活在这些地区，处在登革热传染的危险之下。就其引起人类的发病率和死亡率来论，登革热已成为最重要节肢动物疾病。有4种不同的、但在抗原学上相关的登革热病毒类型。它通过雌性蚊子，特别是埃及伊蚊、白纹伊蚊和波利尼西亚伊蚊来传播。     登革热病毒感染的临床表现多种多样，从亚临床症状到死亡。根据疾病的严重程度可以分级如下：非特异性热性疾病、典型的登革热、登革出血热（DHF）（I级和II级）和登革休克综合症（III 级和IV级）。典型的登革热表现为突然发热伴随着两种或更多种的症状：头痛、后眼眶痛、肌痛、关节痛、出疹、出血表现以及白细胞减少症。双相热型、失眠和由于味觉丧失或苦味引起的食欲不振都很常见。DHF和DSS很严重，是经常伴随着第二种血清型感染而出现的可能会致死的并发症。     在登革热流行的那些国家，大多数病人会有二次感染。抗体的检测有助于诊断，特别是二次和继后的感染，那时并发症的发生率很高。一般地，血凝反应-抑制（HAI）滴度用来分类初次感染或是二次感染。目前结果的确定依赖于至少7天内及时分离得来的配对血清样本的分析，HAI滴度≥ 1:2560的急性样本确定为来自第二次黄病毒属感染的病人。然而，根据HAI分类登革热病例的普遍适用性由于血凝素在不同实验室的可变性而受到了质疑。     Panbio登革热IgG捕获ELISA法是一种替代HAI分析登革热二次感染血清学诊断的有效方法，因为它通过使用标准物校准减少了登革热血清在实验室间的变异。不像HAI，不需要用丙酮萃取血清，如果得到了阳性结果，血清也无须出院后获得。登革热二次感染表现为感染发作后12天出现可检测的高IgG水平，这可能伴随有IgM水平的升高。高IgG水平（>22Panbio单位）因此作为登革热病毒二次感染的标志。

革热IgM 捕获ELISA法 Cat No. E-DEN01M 预定用途： Panbio登革热IgM 捕获ELISA法是一种定量检测血清中登革热IgM抗体的方法，可以作为临床具有登革热症状病人的临床实验室检测辅助手段。Panbio登革热捕获ELISA法应和其它的登革热血清学方法联合应用。 原理： IgM群血清抗体和粘附在微孔测试板聚笨乙烯表面上的抗人IgM抗体相结合。用抗原稀释液把登革热1~4号抗原浓缩液稀释到恰当的工作容量。抗原由昆虫细胞表达系统和一种免疫纯化的单克隆抗体制得而成。在稀释抗原中加入适量的辣根过氧化物酶（HRP）结合单克隆抗体（MAb）形成抗原-MAb复合物。洗去测试板内的残存血清，加入抗原-MAb复合物。孵育后，洗涤微孔板，加入无色底物，四甲基联苯胺/过氧化氢（TMB/H2O2）。底物被酶水解后变成蓝色。加酸终止反应后，TMB变成黄色。颜色的变化表明测试样本中有抗登革热IgM抗体。 提供的材料： 1．抗-人IgM包埋微孔板—（测试板）微孔用抗-人IgM抗体包埋（12*8个孔）。备用。不用的微孔板立即收好，贮存在有干燥剂的地方。在2-8ºC稳定至失效。2. 登革热1-4号抗原（重组体）— 一个透明有盖的玻璃瓶，150 μL（蓝色）浓缩的登革热病毒抗原1,2,3和4号。没有用过的稀释的抗原一定要扔掉。浓缩的抗原贮存于2~8度直至失效。 3. 洗涤缓冲浓缩液— 一瓶60ml用吐温20和防腐剂（0.1% ProclinTM）20倍浓缩的磷酸盐缓冲盐水(pH 7.2-7.6)。在低温下可能会形成结晶。为避免这种情况，把它放在37ºC直至变得透明。充分混匀。在1份洗涤缓冲浓缩液加入19份蒸馏水稀释。稀释的缓冲液在2~25ºC可以贮存一个星期。 4. 血清稀释液-两瓶50ml装（粉红色）。备用。三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水(pH 7.2-7.6) 含防腐剂（0.1% Proclin）和添加剂。在2~8ºC保持稳定直至失效。 5. 抗原稀释液-一瓶50ml装（透明色）。备用。磷酸盐缓冲液含防腐剂（0.1% ProclinTM 和0.005% 庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。 6. 辣根过氧化物酶共轭单克隆抗体示踪剂-一瓶7ml装（黄色）。备用。辣根过氧化物酶共轭单克隆抗体示踪剂含防腐剂（0.1% Proclin.）和蛋白稳定剂。在2~8度保持稳定直至失效。 7. 四甲基联苯胺TMB-一瓶15ml装。备用。3,3,5,5'-TMB和枸酸盐缓冲液（pH 3.5-3.8）内的过氧化氢的混合物。在2~8ºC保持稳定直至失效。 8. IgM阳性对照血清-一个黑色有盖的瓶子装有200 μL人血清（含有0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。 9. IgM标准血清-一个橙色有盖瓶子装有400μL人血清（内含0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。 10. IgM阴性对照血清-一个白色有盖的瓶子装有200 μL人血清（含有0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。 11. 终止液-一个瓶子15ml装。备用。1M磷酸。在2~25ºC保持稳定直至失效。 Proclin. 300是Rohm and Haas公司的注册商标产品对照和标准血清安全注意事项：在这些成份里叠氮化纳的浓度是有毒性的，是属于下列级别(R22, R32)的：“吞食有毒”和“和酸接触会释放出有毒气体” 另外必需具备但不提供的材料： (1) 精确可调节微量移液器（5-1000 μL容量），配备一次性使用吸管 (2) 去离子水 (3) 微量培养板洗涤系统 (4) 酶标仪配备450nm滤波片 (5) 计时器 (6) 刻度量筒 (7) 烧瓶 (8) 血清稀释用的试管或微量滴定板 (9) 抗原稀释用的玻璃或塑料试管或瓶。 警示用于体外诊断用 (i) 用在准备对照时的所有人类来源的材料在测试对人类缺陷性病毒1和2（HIV1和2）、丙型肝炎病毒以及乙型肝炎病毒表面抗原抗体时，都为阴性。但是没有哪种方法能够完全保证，所以所有的人体对照和抗原都应该认为是潜在的感染源。疾病预防控制中心和国家健康署建议可能传染的抗原应该在2级生物安全下进行处理。 (ii) 这种测试只能用血清。用全血、血浆或是其它的样本间质不能做。 (iii) 黄疸的或黄体脂蛋白血清，或表现出溶血的，或有细菌生长的血清都不可用。 (iv) 不要加热失活的血清。 (v) 在开始实验前，所有的试剂必须要平衡至室温（20~25ºC）。试验受到室温变化的影响。只有达到了室温才能把微孔板从密封包里拿出来。 (vi) 用干净的枪头直接在瓶子里配试剂。转移试剂可能会导致污染。 (vii) 未用过的微孔板，应立即重新封存，并储存有干燥剂的地方。如果不这样做可能会造成错误的结果。 (viii) 底物系统 (a) 由于TMB易受金属离子污染影响,所以不允许底物系统和金属表面接触。 (b) 避免长时间暴露于阳光直射下。 (c) 一些洗涤剂可能会干扰TMB的表现。 (d) TMB可能会有一些淡蓝色。这个不会影响底物的活性或者试验的结果。警告 (ix) 这些试剂盒成份内含有叠氮化钠，它可能与铅或铜管道反应形成高爆炸性金属叠氮化合物。当通过水管装置来去除这些试剂时，用大量的水冲洗以防止叠氮积聚在排水管。 (x) 叠氮化钠会抑制结合物的活性。必须用干净的移液管枪头来加结合物以致叠氮化钠不会被其它试剂携带污染。 为获得更多的安全信息请参照从PANBI0得到的原料安全数据表（MSDS） . 标本收集和准备让静脉血在室温下（20~25ºC）凝结成块，然后根据全国临床实验标准委员会(NCCLS)（收集诊断静脉血的认可标准程序，H3-A4, 1998）进行离心。血清应尽快分离并冷藏（2~8ºC），如果在两天内不试验的话，就应该冷冻（-20ºC或更低的温度）。不推荐使用自我解冻的致冷机。黄疸血清、有溶血的、脂血的或是有细菌生长的血清都不推荐使用。CLSI提供贮存血样的建议。（血样处理加工的认可标准程序，H18-A2, 1999）。 测试程序     注意：确保在实验前，所有的试剂都平衡至室温（20~25 ºC）。在超出所提供的时间和温度范围内试验可能会导致无效的结果。没有在即定的时间和温度内进行的试验应重复一次。 血清预稀释 (i) 从箔袋内拿出所需数量的微孔板，并插入夹板固定器。5个板分别是阴性对照，阳性对照和三个标准物。确保剩下未用的微孔板紧紧地密封在箔袋内。 (ii) 用合适的试管或微量滴定板稀释阳性对照，阴性对照，标准物和病人样品。   (a) 在10μL血清中加入1000μL血清稀释液。充分混匀。或者 (b) 在10μL血清中加入90μL血清稀释液。取出20μL稀释的血清加入180μL血清稀释液。充分混匀。 ELISA操作步骤方法概括参见附图 (a)抗原 (i) 确定好你试验所需孔的数量。用抗原稀释液稀释抗原1/250。建议最少要稀释10μL 抗原至2.5ml抗原稀释液。这样才足够做5条带（共有40个孔）。每条带都需要0.5ml稀释的抗原。一旦抗原被加入了抗原稀释液，那溶液就会变成淡蓝色。确保剩下没用的浓缩抗原贮存在2~8 ºC。 (ii) 取出需要量的稀释抗原，然后在一个干净的玻璃或塑料瓶里混合相同体积的MAb 示踪剂。轻轻地混匀抗原和MAb 示踪剂溶液，再在室温下保持至所需时。弃掉没用过的稀释抗原。 (b) 测试板 (iii) 混匀后10分钟内，吸取100μL稀释的病人样本和对照，分别加入测试板相应的微孔内。 (iv) 盖上测试板，在37 ºC±1 ºC孵育1小时。 (v) 用稀释的洗涤缓冲液冲洗6次。（参见下面的冲洗步骤） (vi) 混匀抗原和MAb示踪剂。吸取100 μL混匀物，加入测试板相应的孔内。 (vii) 盖上测试板，在37 ºC±1 ºC孵育1小时。 (viii) 用稀释的洗涤缓冲液冲洗6次。（参见下面的冲洗步骤） (ix) 在每个孔内加入100 μLTMB。 (x) 从第一次加入算起，在室温下(20-25 ºC)培育10分钟。蓝色将会出现。 (xi) 按TMB加入的时间和顺序，在所有的孔内加入100 μL终止液。混匀。蓝色将会变成黄色。 (xii) 30分钟内读数，波长450nm，参照滤波器600~650nm。注意：如果是双波长分光光度计，在600~650nm间设定参照滤波。如果在450nm读数没有参照滤波时，可能会由于背景因素出现更高的吸光值。 冲洗步骤：有效的冲洗能去除没有混合的样品或成分，这对于ELISA程序是很有必要。 A. 全自动冲洗板 (1) 吸光所有孔内容物。 (2) 在冲洗过程中，洗涤缓冲液要注满孔（350 μL） (3) 6次冲洗完后，把板翻转，在吸水纸上用力敲打确保去除所有的冲洗缓冲液。 (4) 全自动冲洗板一定要维护好，确保冲洗效果。在所有时间内都要遵照制造商的冲洗说明。 B. 人工冲洗 (1) 把内容物倒入合适的废物缸。 (2) 用一个合适的挤压瓶把洗涤缓冲液加满孔，避免起泡，因为这可能会降低冲洗效果。立即倒掉缓冲液。 (3) 重新加满，再立即倒掉。 (4) 再重复4次步骤3。总共用洗涤缓冲液洗6次。 (5) 洗完最后一次后，倒掉孔内容物，把板翻转，在吸水纸上用力敲打确保去除所有的冲洗缓冲液。 质量控制： 每个试剂盒包括标准物，阳性对照和阴性对照血清。 在随附的说明表列有这些血清合适值。那阴性和阳性对照是用来监测由试剂引起的失败。阳性对照不能确保试验临界点的精确度。如果对照或标准的吸光度值没有达到说明书标准，则测试无效，就应该重做。如果测试无效，病人结果就不能报告。质量控制需要必须遵照当地的、州和/或国家法律或委任书和你们实验室标准质量程序。建议用户参照NCLSI C24-A和42 CFR 493.1202(c)中的合适的质量控制实践指导。计算：重要提示：校准系数是一组特性，详细列在说明书上了。在开始计算前，得到校准系数值。 (1) 计算三个标准物的平均吸光度值，然后和校准系数相乘。这就是临界值。 (2) 样品的吸光度除以临界值就得到指数值。或者 (3) 指数值乘以10就得到Panbio 单位。 指数值=样品的吸光度/临界值例如：样品A的吸光度=0.949 样品B的吸光度=0.070 标准物的平均吸光度=0.802 校准系数=0.62 临界值=0.802 X 0.62=0.497 样品A (0.949/0.497)=1.91 指数值样品B (0.070/0.497)=0.14 指数值 Panbio 单位=指数值 X 10 样品A  1.91 X 10 = 19.1 Panbio 单位样品B  0.14 X 10 = 1.4 Panbio 单位